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核酸分离提取
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四大经典核酸纯化方法及评价
2014-03-20 13:47   查看  

洛阳惠尔纳米科技园 河南省重点纳米生物材料工程实验室)
 
     核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础,核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素,也是下游分子生物学试验成败的关键。目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法,这几种方法各有其优势和劣势。
一、PC抽提法
     PC 抽提是去除蛋白质有效的手段,但超过了该饱和度,裂解体系中的蛋白质不会被一次去除,必须靠多次抽提,方可彻底去除。且每次抽提都会损失部分核酸。另外,体系太粘稠的坏处是,蛋白质难以彻底去除,以及基因组 DNA 会断裂得更厉害,所以要注意裂解液与样品的比例。PC 抽提的另外一个用途是,利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特点,在 RNA 抽提时获得 DNA 残留极少的 RNA。不过有一点要提醒的是,某些植物样品,在去除某些杂质之前,是不能使用 PC 抽提的,否则核酸必定降解。PC抽提最大的优势是成本低廉,对实验条件要求较低,对于经费紧张的实验室较为实用。
二、高盐沉淀法
     高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法,同样也是一个非常不错的方法。与 PC 抽提方法相比,除了纯度的稳定性可能要低一点外,该方法几乎克服了 PC 抽提的所有缺点。更快、更轻松的去除蛋白质所可以用于大规模抽提,但其不足之处是纯度 (蛋白质残留) 不够稳定,蛋白质的沉淀效率在4℃会更好一些。
三、离心柱法
     离心柱纯化法,是目前试剂盒提取广泛应用的方法。其最大特点是受人为操作因素影响小,纯度的稳定性很高 (虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中,与含有核酸的柱子完全是分开的,所以洗涤更彻底。其致命弱点是样品过量,提取效率较低,且需要反复离心,操作复杂,成本也较高。
四、生物磁珠法
     生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面,通过介质对核酸的吸附,在外加磁场下使核酸附着于磁珠定向移动,从而达到固液分离纯化的作用。与其他几种方法相比,生物磁珠法具有很多无法比拟的优势,如:
①提取灵敏度高(微量材料即可提取)
②纯化纯度高(完全与蛋白盐等杂质分离)
③提取产量高(每mg磁珠能吸附500ug DNA)
④分离快速(磁分离只需几秒)
⑤自动化操作(加液后完全机器自动化操作,无需人力,提高效率)
⑥高通量提取(可同时完成几十甚至几百个样品的提取)
⑦无毒无害无污染(试剂中不含任何氯仿、酚等,操作环境更加安全)
     生物磁珠法纯化核酸的普及需要磁分离装置的同步跟进,如磁力架或自动提取仪。目前,各类磁分离装置主要来自于进口,不仅价格较高,而且售后服务质量也偏低。因此,向大家推荐洛阳惠尔纳米科技园自主研发的磁力架、磁力笔及全自动核酸提取仪,该装置通过技术创新,大大提高了灵活机动性,在操作上更加方便快捷,有效解决了磁分离装置对磁珠法核酸提取的限制,受到科研工作者的一致好评。
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